10. Система стандартизации лрс
Контроль качества лекарственного растительного сырья. Обеспечение надлежащего качества лекарственного растительного сырья во многом зависит от правильной организации контроля, его действенности и эффективности, а также от уровня требований, заложенных в НД и используемых методов анализа.
Государственная система контроля качества лекарственных средств охватывает все стадии изыскания, апробации, производства и применения лекарственных средств. В равной степени это относится и к контролю качества лекарственного растительного сырья.
В системе контроля качества лекарственного растительного сырья выделяют три уровня:
• товароведческий анализ в аптеках;
• анализ на полное соответствие требованиям НД на аптечных складах (базах);
• анализ на соответствие требованиям НД на фармацевтических фабриках производственных объединений и акционерных обществ и на промышленных государственных предприятиях.
Товароведческий анализ в аптеках. Этому виду контроля подвергается все лекарственное растительное сырье, поступающее от заготовителей. Товароведческий анализ заключается в проверке подлинности сырья по внешним признакам, качественным реакциям в соответствии с требованиями НД. Результаты анализа регистрируются в журнале. Прием лекарственного растительного сырья оформляют приемной квитанцией.
Для проведения анализа на соответствие требованиям НД по всем показателям отбирается средняя проба от каждого наименования сырья и направляется в контрольно-аналитическую лабораторию по подчиненности. Реализация лекарственного растительного сырья, принятого от заготовителей, производится только после письменного заключения контрольно-аналитической лаборатории. При отборе средней пробы руководствуются требованиями ГФ XI.
Приемка лекарственного растительного сырья и методы отбора проб для анализа на складах, базах и промышленных предприятиях
Приемка и отбор проб регулируются ГФ XI (Т. 1, с. 267) или нормативами ГОСТ 24027.0—80 "Правила приемки и методы отбора проб"
Приемку лекарственного растительного сырья производят партиями. Партией считают количество сырья не менее 50 кг одного наименования, однородного по всем показателям и оформленного одним документом, удостоверяющим его качество. Документ должен содержать следующие данные: номер и дату его выдачи; наименование и адрес отправителя; наименование сырья; номер партии; массу партии; год и месяц сбора или заготовки; район заготовки (для сырья от дикорастущих растений); результат испытаний качества сырья (проводится в лаборатории отправителя); наименование НД, регламентирующего качество сырья: подпись и должность ответственного лица.
После осмотра внешнего вида упаковки всех единиц в партии приступают к отбору единиц продукции для анализа. Их берут из разных мест партии в количестве, указанном ниже.
Количество единиц продукции Объем выборки
Свыше 50 10 % единиц продукции составляющей партию
Отобранные единицы продукции вскрывают и визуально определяют однородность сырья по способу подготовки (цельное, измельченное, прессованное и т.д.), цвету, запаху, засоренности; наличию плесени, гнили, устойчивого постороннего запаха, не исчезающего при проветривании; засоренности ядовитыми растениями и посторонними примесями (камни, стекло, помет). Одновременно невооруженным глазом или с помощью лупы (х5—10) определяют наличие амбарных вредителей.
При установлении неоднородности сырья, наличии плесени и гнили, засоренности посторонними растениями в количествах, явно превышающих допустимые, вся партия должна быть рассортирована поставщиком, после чего вторично предъявлена к приемке.
При обнаружении в сырье устойчивого постороннего запаха, не исчезающего при проветривании, ядовитых растений, помета животных, зараженности амбарными вредителями II и III степеней партия сырья не подлежит приемке.
Из каждой отобранной и вскрытой единицы продукции берут три точечные пробы: сверху, из середины и снизу на глубине не менее 10 см от края упаковки.
Точечной пробой считается количество лекарственного растительного сырья, отбираемого от единицы продукции за один прием рукой или щупом. Масса точечных проб не регламентируется, но они должны быть по возможности примерно одинаковыми.
Из всех точечных проб, которые складываются на товароведческой доске или столе с бортиками, составляют объединенную пробу. Объединенная проба — это совокупность всех точечных проб, отобранных из партии лекарственного сырья и тщательно (но с осторожностью) перемешанных между собой. Масса объединенной пробы неопределенна и зависит от величины партии, особенностей сырья, величины точечных проб и т.д.
Все последующие пробы, необходимые для проведения различных испытаний, выделяют методом квартования (рис. 5.1).
Суть метода квартования состоит в том, что сырье разравнивают на столе или товароведческой доске в виде квадрата по возможности тонким равномерным по тол шине слоем и по диагонали делят на 4 треугольника. Два противоположных треугольника сырья удаляют, а 2 оставшихся соединяют вместе, осторожно перемешивают и вновь разравнивают в виде квадрата. Эту процедуру повторяют до тех пор, пока в двух противоположных треугольниках не останется сырье, по массе соответствующее массе средней пробы, необходимой для анализа данного вида сырья (возможны отклонения ± 10 %).
Помимо средней пробы, из объединенной пробы (это совмещают с выделением средней) выделяют пробу массой 500 г для мелких видов и
1000 г для крупных видов сырья, необходимую для точного установления степени зараженности амбарными вредителями. Эту пробу помещают в плотно закрывающуюся банку, снабдив ее этикеткой.
Из объединенной пробы выделяют также пробы для определения содержания радионуклидов (масса 500—1000 г) и микробиологической чистоты (50 г).
Среднюю пробу также упаковывают, снабдив этикетками на упаковке и внутри нее, где, помимо содержимого документа, сопровождающего партию, следует указать дату отбора пробы и фамилию лица, ее отбиравшего.
Из средней пробы методом квартования выделяют три аналитические пробы для определения подлинности, измельченности и содержания примесей, золы, влажности и действующих веществ. Две последние берут после грубого измельчения средней пробы.
Аналитической пробой называют часть анализируемой средней пробы, представительно отражающей качество сырья предложенной партии.
Погрешность при взвешивании аналитических проб варьирует от 0,01 г (при массе пробы до 50 г) до 5 г (при массе пробы более 1000 г). Аналитическую пробу для определения влажности отделяют из средней пробы первой и немедленно упаковывают герметически.
Анализ на соответствие требованиям НД проводят на аптечных складах (базах). Каждую партию лекарственного растительного сырья, поступающую на аптечный склад (базу), как "ангро", так и в расфасованном виде (независимо от завода-изготовителя и поставщика), проверяют на подлинность, измельченность и содержание примесей. Брикеты, кроме того, проверяют на прочность и распадаемость.
При отправке лекарственного растительного сырья другим аптечным складам (базам) каждая отправляемая партия сопровождается заверенной копией протокола анализа, удостоверяющего качество каждой партии. При поступлении на другие аптечные склады лекарственное растительное сырье также подвергается анализу.
Для проведения анализа провизор-аналитик (отборщик проб) приемного отдела склада отбирает от каждой поступившей партии среднюю пробу. После внешнего осмотра для проверки соответствия качества требованиям НД производится выборка из неповрежденных упаковок, взятых из разных мест. Проверку качества лекарственного растительного сырья из поврежденных единиц упаковок производят отдельно от неповрежденных, вскрывая каждую единицу упаковки.
Отобранные пробы в упакованном виде, склеенные этикеткой с указанием наименования лекарственного растительного сырья, номера партии (серии), ее массы, даты отбора пробы, фамилии отборщика пробы, направляются на анализ в контрольно-аналитическую лабораторию или лабораторию склада.
Результаты анализа оформляются аналитическим паспортом, который выписывают в двух экземплярах. Первый передается в отдел хранения склада и служит основанием для отпуска сырья в аптечные учреждения, второй хранится в лаборатории.
Отбор проб фасованной продукции (пачки, полиэтиленовые пакеты, брикеты, сигареты) осуществляется согласно ГФ XI (т. 1, с. 273).
Фармакогностический анализ лекарственного растительного сырья.
Лекарственное сырье и полученные из него продукты представляют собой полноценный материал в том случае, если они по всем параметрам соответствуют действующим НД. Это соответствие определяется путем проведения фармакогностического анализа. Под фармакогностическим анализом подразумевается комплекс методов анализа сырья растительного и животного происхождения, позволяющих определить подлинность и доброкачественность последнего.
Подлинность — это соответствие исследуемого объекта наименованию, под которым он поступил на анализ.
Доброкачественность — соответствие лекарственного сырья фармакологическим требованиям НД.
Фармакогностический анализ нормативно регулируется документам двух типов: с одной стороны, ГОСТ и соответствующие общие статьи ГФ. нормирующие правила приемки, методы отбора проб, методы определения подлинности и доброкачественности лекарственного растительного сырь?, с другой — ГОСТ, ФС, ФСП, ОСТ и ТУ, определяющие требования * конкретному виду сырья.
Фармакогностический анализ складывается из ряда последовательно проводимых анализов —- товароведческого, макроскопического, микроскопического и фитохимического. В некоторых случаях он дополняется определением биологической активности сырья.
Подлинность сырья, как правило, устанавливается путем макроскопического и микроскопического анализа, реже используются элементы фитохимического анализа путем проведения качественных реакций на наличие в сырье тех или иных групп соединений. Доброкачественность определяется на основе данных товароведческого и фитохимического анализов и,если необходимо, путем установления биологической активности сырья.
Товароведческий анализ включает правила приемки сырья, регламентирует отбор проб для проведения последующих испытаний сырья на содержание примесей, степень измельченности, пораженности вредителями, содержание золы, влаги и действующих веществ. ,,
В ходе товароведческого анализа выясняют наличие амбарных вредителей, обращают внимание на отсутствие устойчивого постороннего плесени и гнили, примесей ядовитых растений, помета грызунов и v л < XI, т. 1, с. 269).
Макроскопический анализ состоит в определении морфологических (внешних) признаков испытуемого сырья визуально — невооруженным глазом или с помощью лупы (х10). Осуществляются также измерения линейкой, отмечаются окраска, запах сырья и вкус (для неядовитых объектов!). Общие правила проведения макроскопического анализа для установления подлинности указаны в статьях ГФ XI "Листья" (т. 1, с. 252), "Травы" (т. 1, с. 256), "Цветки" (т. 1, с. 257), "Плоды" (т. 1, с. 258), "Семена" (т. 1, с. 260), "Кора" (т. 1, с. 261), "Корни, корневища, луковицы, клубни, клубнелуковицы" (т. 1, с. 263). Полученные в результате такого анализа данные сравнивают с данными, приведенными в разделе "Внешние признаки" НД на анализируемый вид сырья. Макроскопический анализ наиболее надежен при определении подлинности цельного сырья.
Как сказано, подлинность устанавливается также и на основании микроскопического анализа цельного, измельченного, резано-прессованного, брикетированного сырья. Этот вид анализа приобретает особое значение в трех последних случаях. Анализ основан на выявлении анатомических диагностических признаков с помощью микроскопа. Техника микроскопического исследования (включая люминесцентную микроскопию и гистохимические реакции) подробно изложена в общих статьях ГФ XI, перечисленных выше.
Практически во всех НД на отдельные виды сырья в настоящее время имеются данные, характеризующие анатомические диагностические признаки. В статьях ГФ XI они выделены в раздел "Микроскопия", в ГОСТах включены в раздел "Методы испытаний".
Доброкачественность сырья определяется путем товароведческого и фитохимического анализа. В ходе товароведческого анализа определяют числовые показатели: содержание влаги — ГФ XI (т. I, с. 285) или ГОСТ 24027.2—80; золы — этот же ГОСТ или ГФ XI (т. 2, с. 24); дубильных веществ — ГФ XI (т. 1, с. 286) или тот же ГОСТ; эфирного масла — ГФ XI (т. 1, с. 290) или ГОСТ 24027.2—80, экстрактивных веществ — ГФ XI (т. I, с. 295) или тот же ГОСТ; степень зараженности сырья амбарными вредителями - ГФ XI (т. 1, с. 276) или ГОСТ 24027.1-80.
Фитохимический анализ — вид анализа, используемый для качественного и количественного определения действующих веществ с помощью химических и физико-химических методов. Эти методы отчасти описаны в ГФ XI (вып. 1, с. 95 и 159), отчасти (конкретные методы определения) в статьях ГФ XI на виды лекарственного растительного сырья (ГФ XI, вып. 2) или в Других НД (ФС, ФСП, ГОСТ, ОСТ, ТУ).
Вредители лекарственного растительного сырья и борьба с ними.
В процессе транспортирования и при неправильном хранении лекарственное сырье, как и другое растительное, может подвергаться порче амбарными вредителями. Чаще всего порче подвержено сырье, богатое полисахаридами (крахмалом, инулином), сочные плоды, богатые сахарами, некоторые сухие плоды и семена, богатые жирным маслом.
Амбарные вредители ухудшают качество сырья, способствуют его самосогреванию, загрязняют сырье, тару, хранилища, оборудование, транспортные средства. К амбарным вредителям относятся клещи, долгоносики, точильщики, моль, грызуны (рис. 5.2).
Рис. 5.2. Вредители лекарственного растительного сырья.
1 — амбарный долгоносик и его личинка; 2 — хлебный точильщик и его личинка; 3 — хлебная, или амбарная, моль и ее личинка; 4 — мучной клещ.
Большой вред сырью, таре, помещениям для хранения наносят крысы J
и мыши. Они заражают и загрязняют многие виды сырья, особенно плоды можжевельника и плоды зонтичных.
Меры борьбы с вредителями лекарственного сырья могут быть предупредительные и истребительные. К предупредительным мерам относятся подготовка. очистка и обеззараживание складских помещений, перерабатывающих предприятий, машин, механизмов, соблюдение санитарно-гигиенических правил хранения лекарственного сырья; к истребительным — физико-механические и химические средства дезинсекции. Дезинсекцию проводят с помощью сероуглерода (реже хлорпикрина). Зараженное сырье помешают в таре в герметически закрывающееся помещение. В разных местах кабины на штабелях с сырьем расставляют плоские чашки, в которые наливают сероуглерод. Дверь быстро закрывают, щели замазывают алебастром. В газовой среде сырье выдерживают от 2 (летом) до 7 (зимой) дней. По истечении этого времени камеру открывают и дают газу улетучиться. Сероуглерод огнеопасен, в связи с чем работа с ним требует особой осторожности. В летний период для дезинсекции можно использовать солнечную радиацию. Сырье, которое не теряет внешнего вида под воздействием солнечных лучей, помещают на темные подстилки и прогревают в течение нескольких часов.
Дератизацию помещений проводят общеизвестными способами. Весьма эффективны для дератизации ловчие бочки.
Мероприятия по борьбе с амбарными вредителями должны быть комплексными с соблюдением мер личной и противопожарной безопасности.
Определяют степень зараженности лекарственного растительного сырья амбарными вредителями. Исследование на наличие амбарных вредителей осуществляют в обязательном порядке при приемке лекарственного растительного сырья, а также ежегодно при хранении. Метод определения степени зараженности сырья амбарными вредителями изложен в ГФ XI (т. 1, с. 276) и ГОСТ 24027.1—80. Проба для установления степени зараженности вредителями выделяется методом квартования из объединенной пробы массой 500 г для мелких видов сырья и массой 1000 г для крупных видов сырья [ГФ XI (т. 1, с. 269) и ГОСТ 24027.0-80].
При анализе определяют степень зараженности по наличию клещей и других насекомых в пересчете на 1 кг сырья.
Аналитическую пробу просеивают сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. В сырье, прошедшем сквозь сито, проверяют наличие клещей (лупа х5—10), моли, точильщика и их личинок, живых и мертвых насекомых, подсчитывают их число в сырье, оставшемся на сите.
Различают три степени зараженности сырья вредителями: I степень — в 1 кг сырья не более 20 клещей или не более 5 насекомых; II степень — более 20 клещей, свободно передвигающихся по поверхности сырья и не образующих сплошных масс, или 6—10 экземпляров моли, точильщика и их личинок; III степень — клещи образуют сплошные войлочные массы, движение их затруднено, или более 10 экземпляров насекомых в сырье (моль, точильщик, их личинки и др.).
Сырье, зараженное вредителями, после дезинсекции просеивают сквозь сито с отверстиями 0,5 мм (при зараженности клещами) или 3 мм (при зараженности другими вредителями).
После обработки сырье I степени зараженности вредителями может быть допущено к медицинскому применению. При II степени и в исключительных случаях при III степени зараженности сырье может быть использовано для переработки с целью получения индивидуальных веществ, в остальных случаях сырье уничтожают.
Определение влажности лекарственного растительного сырья.
Воздушно-сухое сырье содержит обычно 10—15 % гигроскопической влаги. Повышенное содержание влаги в сырье приводит к его порче: изменяется окраска сырья, появляется затхлый запах, плесень, разрушаются действующие вещества. Такое сырье нельзя использовать. НД для каждого вида сырья устанавливает норму содержания влаги (влажность) не выше определенного значения.
Под влажностью сырья в товароведческом анализе понимают не только
потерю в массе при высушивании за счет гигроскопической воды,но фактически и других летучих веществ.
Известны различные способы определения влажности. В частности иногда в сырье определение влажности осуществляется методом отгонки. Для этого разработаны специальные приборы (например, прибор Дина и Старка). Существуют химические методы, из которых наиболее известен метод Карла Фишера (Британская фармакопея). Кроме того, разработав спектроскопические и электрометрические методы и соответствующие приборы, которые позволяют определять влажность с минимальными затратами времени.
В ГФ XI (т. 1, с. 285) для определения влажности в лекарственном растительном сырье принят метод высушивания до постоянной массы при температуре 100—105 °С.
Определение содержания золы.
Лекарственное растительное сырье содержит не только органические, но и минеральные вещества. Кроме того, сырье, особенно подземные часа растений, бывает загрязнено посторонними минеральными примесями: кусочками земли, камешками, песком, пылью на густоопушенных листьях и др. Нормирование их уровня в сырье является условием получения качественного сырья. С этой целью почти для всех видов сырья определяется содержание общей золы, а для сырья, используемого для приготовлена настоев и отваров, — содержание золы, нерастворимой в 10 % раствор хлористоводородной кислоты.
Общая зола — это остаток несгораемых неорганических веществ, оставшийся после сжигания и прокаливания сырья. Этот остаток состоит в минеральных веществ, свойственных растению, и посторонних минеральных примесей (земля, песок, камешки, пыль).
Зола, нерастворимая в 10 % растворе хлористоводородной кислоты, обстоит в основном из оксида кремния и характеризует загрязненность сырья посторонними минеральными примесями.
Методы определения золы изложены в ГФ XI (т. 2, с. 24).
Определение содержания экстрактивных веществ.
Под экстрактивными веществами понимают массу сухого остатка,полученного после упаривания вытяжки из лекарственного растительного сырья, полученной с помощью определенного растворителя, указанного в НД данный вид сырья. Определение экстрактивных веществ в сырье проводят в тех случаях, когда действует комплекс биологически активных веществ или не разработан метод количественного определения действующих веществ. Содержание экстрактивных веществ, как и действующих, зависит соблюдения сроков, района заготовки сырья и должно быть не менее > данной в НД нормы.
Общая характеристика метода приведена в ГФ XI (вып. I, с. 295).Количественное определение экстрактивных веществ проводится методом экстракции определенным видом растворителя точной навески измельченного сырья при слабом кипении с обратным холодильником в течение 2 ч после предварительного настаивания в течение 1 ч.
Основные методы фитохимического анализа лекарственного растительного сырья.
Большинство современных НД на лекарственное растительное сырье в качестве одного из важнейших числовых показателей включает нормирование содержания основных физиологически активных веществ. Их определение проводится с использованием химических и физико-химических методов.
Для извлечения органических соединений из природных объектов чаще всего используют экстракцию растворителями или перегонку с водяным паром. В обоих случаях получают смесь компонентов, которую затем очищают от примесей, делят на отдельные фракции или индивидуальные вещества с помощью ряда операций: последовательной обработки смеси различными растворителями, распределения веществ между двумя несмешивающимися растворителями, методов хроматографии.
Хроматографический метод — один из важных и распространенных методов фитохимического анализа. Он эффективен и удобен для разделения многокомпонентных смесей, очистки и идентификации соединений. По механизму разделения различают три основных вида хроматографии: адсорбционную, распределительную и ионообменную. В основе их лежат неодинаковая степень адсорбируемости молекул (ионов) на твердом веществе (адсорбционная или ионообменная хроматография) или различное распределение их между двумя несмешивающимися жидкими фазами, одна из которых связана с твердым носителем (распределительная хроматография). В зависимости от целей и задач анализа применяют различные сорбенты и виды хроматографии: колоночную, бумажную и тонкослойную. Бумажная и тонкослойная хроматография позволяет работать с микроколичествами органических веществ и не требует дорогостоящей аппаратуры.
Более надежными и эффективными методами, получившими распространение в аналитических и научно-исследовательских лабораториях, считаются газожидкостная (ГЖХ) и высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). В основе ГЖХ лежат законы распределения вещества между двумя фазами, одна из которых подвижна. В данном случае в качестве подвижной фазы используют инертный газ (гелий, аргон, азот), а неподвижной фазой является жидкость, нанесенная на инертное твердое тело (сорбент). Сорбент помещают в хроматографическую колонку U-образной или спиралевидной формы. Автоматическое устройство фиксирует разделяемые вещества на выходе из колонки по их физическим и химическим свойствам, а самописец регистрирует качественный и количественный состав смеси. Метод ГЖХ позволяет анализировать смеси летучих веществ или их производных.
В последние годы успешно развивается ВЭЖХ. Она является вариантом колоночной хроматографии, но подвижная фаза — элюэнт — проходит через колонку с большой скоростью за счет высокого давления. Этот вид хроматографии является удобным методом для разделения, препаративного выделения и проведения качественного и количественного анализа нелетучих термолабильных соединений.
При качественном анализе используют общие и специфические реактивы на группы действующих веществ или отдельные компоненты. Наиболее удобный способ их обнаружения — бумажная и тонкослойная хроматография. На хроматограммах действующие вещества проявляются после просматривания в УФ-свете (флавоноиды, кумарины) или после обработки специфическими реактивами (алкалоиды, сапонины, аминокислоты). Имеются возможности для идентификации доминирующих компонентов по характерной флюоресценции или окраске с реактивами, значению R, и путем сравнения со стандартными образцами.
Для проведения количественного анализа используют методы, основанные на химических и физических свойствах исследуемых соединений. Основными требованиями, предъявляемыми к методам анализа, являются точность и чувствительность. Особое значение приобретают экспрессные методы анализа, позволяющие оперативно контролировать образцы растительного сырья по мере поступления его от заготовителя к потребителю. К традиционным методам количественного анализа относятся гравиметрические и титрометрические методы. Все большее место занимают оптические методы, реже используются электрохимические методы анализа.
Гравиметрический (весовой) анализ основан на выделении суммы веществ путем их осаждения из различных растворителей или за счет получения нерастворимых комплексных соединений и последующего установления массы взвешиванием осадка на аналитических весах. Точность метода определяется чувствительностью весов, которая обычно составляет ±0,0001 г.
Титрометрические (объемные) методы весьма разнообразны и зависят опт химических свойств исследуемых соединений. Для этих целей используются методы прямого и обратного титрования. В основе титрометрических методов могут быть реакции следующих типов: кислотно-основные, окислительно-восстановительные, реакции осаждения и образования комплексных соединений. Определение некоторых оснований или кислот, титрование которых в воде затруднено или невозможно из-за слабых кислотно-основных свойств или малой растворимости (например, некоторые алкалоиды, аминокислоты и пр.), проводят в неводных растворах. Широко распространены методы титрования окислителями — перманганатометрия (определение дубильных веществ в сырье), йодометрия (определение арбутина в листьях толокнянки и брусники) и др.
К оптическим методам относятся фотометрия, флюориметрия, денсито-метрия с использованием хроматографии на бумаге и в тонком (закрепленном и незакрепленном) слое сорбента, а также поляриметрия.
Фотометрический анализ основан на измерении количества света, поглощенного раствором вещества в видимой, ультрафиолетовой и инфракрасной областях спектра. Для количественного определения некоторых природных соединений в сырье и лекарственных препаратах наиболее часто применяют фотоколориметрию и спектрофотометрию.
Спектрофотометрический анализ позволяет определять в растворе ароматические соединения (флавоноиды, фенолокислоты, кумарины, лигнаны и др.) с высокой точностью и чувствительностью при этом как суммы веществ, так и индивидуальных компонентов. Метод базируется на избирательном поглощении монохроматического света с определенной длиной волны раствором исследуемого вещества. Для этой цели служат отечественные спектрометры, позволяющие вычислить поглощение света не только окрашенных, но и бесцветных растворов в видимой или ультрафиолетовой (от 190 до 400 нм) областях спектра.
Фотоколориметрия основана на измерении поглощения немонохроматического света на довольно широком участке спектра, выделяемом с помощью светофильтров. Определение оптической плотности осуществляют на фотоэлектроколориметрах различных типов.
В фотометрии расчет концентрации вещества в анализируемом растворе
проводят одним из трех методов: по молярному или удельному коэффициенту поглощения, методом сравнения оптических плотностей стандартных и исследуемых растворов и по калибровочному графику. Наибольшее распространение получил последний метод.
Флюориметрический анализ основан на измерении интенсивности люминесценции испытуемых веществ. Это самый чувствительный метод при анализе кумаринов, флавоноидов и антрахинонов. Практически люминесценцию определяют в растворах с концентрацией 10̄̄̄҅⁵—10̄҅ 6 моль/л, когда между ее интенсивностью и концентрацией вещества наблюдается прямолинейная зависимость. Для выполнения анализа используют флюориметры или спектрофлюориметры. Метод используется пока ограниченно.
Поляриметрия — метод, основанный на определении содержания вещества в сырье по вращению плоскости поляризации. Этим методом можно определять только оптически активные соединения (например, алкалоиды, терпеноиды, гликозиды). Величину отклонения плоскости поляризации от начального положения, выраженную в угловых градусах (угол вращения), определяют на поляриметре с точностью ±0,02°. Значение последнего зависит от природы вещества, его концентрации, толщины слоя, длины волны света и температуры. Таким образом, при постоянстве всех параметров: толщины слоя, длины волны и температуры — для данного соединения угол вращения зависит только от концентрации.
Из электрохимических методов при анализе сырья наибольшее применение находят потенциометрическое титрование и полярография.
В основе потенциометрического анализа лежит определение концентрации ионов путем измерения электродвижущей силы элемента, состоящего из двух электродов: индикаторного и электрода сравнения. Потенциометрическое титрование представляет собой вид объемного анализа, при котором конец титрования обусловлен скачком потенциала индикаторного электрода. Этот метод имеет ряд преимуществ перед визуальным, он более чувствителен и объективен.
Полярографический анализ базируется на измерении силы тока, возникающего при электролизе раствора анализируемого вещества на микроэлектроде (ртутный капающий электрод). При помощи этого метода определяют соединения, способные к электровосстановлению, реже — окисляющиеся при электролизе (например, при определении фурокумаринов и флавоноидов). По кривой зависимости силы тока от напряжения в данных условиях анализа можно судить о составе и концентрации анализируемого вещества. Метод заслуживает внимания и особенно незаменим в научно-исследовательских разработках. Широкое применение полярографического анализа встречает затруднения, так как требует соблюдения строгих мер безопасности при работе с ртутью.
К методам анализа, основанным на физических свойствах, относится метод перегонки, или дистилляции, летучих веществ (эфирных масел) с водяным паром. Содержание эфирного масла в растительном сырье определяют способами, описанными в ГФ XI (вып. 1). Количество перегнанного масла измеряют с помощью специальных приборов и рассчитывают его содержание в весообъемных процентах на абсолютно сухое сырье.
В тех случаях, когда качество лекарственного сырья не может быть удовлетворительно определено химическими или физическими методами, используется биологический анализ. Этот метод, например, очень важен при анализе карденолидов и буфадиенолидов. В основу его положено токсическое действие сердечных гликозидов на организм животного, в результате
Чего наступает систолическая остановка сердца. При проведении биологического анализа испытуемый образец сравнивают со стандартным препаратом и активность его выражают в единицах действия. Испытание стандартного и исследуемого образцов рекомендуется проводить одновременно и в строго одинаковых условиях. Биологические методы имеют существенные недостатки: трудоемкость, дороговизна, малая точность, не отражают истинного содержания действующих веществ.
Влияние антропогенных факторов на качество лекарственного растительного сырья.
Лекарственные растения не относятся к основным источникам поступления ксенобиотиков (чуждых организму веществ) в организм человека. Однако специфика объекта с позиций основной заповеди врача "Не навреди" требует рассмотрения этой проблемы как фактора риска для здоровья людей.
Следует заметить, что в отличие от традиционных объектов изучения на присутствие ксенобиотиков, таких как продукты питания, воздух и вода, лекарственные растения и продукты их переработки, только недавно привлекли в этом плане внимание отечественных исследователей. В принятых отечественных и зарубежных НД практически отсутствуют регламентируемые требования по предельному содержанию ксенобиотиков, но эта проблема, пока не выходящая за рамки научных дискуссий, приобретает с каждым годом все более явный практический интерес.
Вся цепочка поступления чужеродных веществ в организм человека может быть представлена в виде схемы.
Антропогенные -» Лекарственные -» Сырье -> Лекарственные -» Человек воздействия растения формы
выбросов, через пыль
При этом каждый переход к следующему этапу сопровождается уменьшением антропогенной нагрузки. Это обусловлено избирательной и ограниченной аккумуляцией растениями токсичных веществ; использованием в качестве лекарственного сырья лишь отдельных частей растений, способных в различной степени подвергаться антропогенным воздействиям; ограниченным извлечением токсикантов из сырья в лекарственные формы; различным способом поступления готовых лекарственных форм в организм человека (наружное, внутреннее, внутривенное и т.д.). Отсутствие точно установленных закономерностей этих процессов порождает многочисленные проблемы, до разрешения которых хотя бы в общих чертах затруднительна разработка законодательных положений по контролю и введению соответствующих ПДК (предельно допустимых концентраций) тех или иных ксенобиотиков.
Существует несколько аспектов проблемы, хотя и взаимосвязанных между собой, но разрешенных в научном и практическом отношении в разной степени. Первый аспект проблемы исключительно методический, опделяется необходимостью разработки методик проведения репрезентативных выборок, представительно отражающих состояние всей массы объектов на каждом из звеньев исследуемой цепочки. Это фармакогностическая проблема, которая в деталях пока не разработана. Следующий аспект может быть именован как чисто экологический. Речь идет о выяснении конкретных путей проникновения токсикантов в растение. Здесь главнейшими, очевидно, будут газообразные выбросы, пыль промышленных предприятий и загрязненная токсикантами почва. Значение каждого из этих основных источников загрязнения различно и подлежит специальному целенаправленному изучению. С этим аспектом тесно связано исследование реакции отдельных видов на разного рода антропогенные загрязнения и изучение характера накопления токсикантов в различных органах и тканях.
Наконец, третий аспект проблемы — аналитический. Он состоит в разработке современных методик анализа содержания токсикантов и в то же время адаптации этих методик для массовых анализов в условиях производственных лабораторий.
Итоговый аспект — законодательный. Он связан с введением соответствующих ПДК и разработкой рекомендаций, регламентирующих районы и места заготовок растительного сырья в зависимости от характера и интенсивности конкретных видов антропогенного воздействия.
Существует несколько групп ксенобиотиков, представляющих наибольшую опасность для организма человека. Речь идет о тяжелых металлах, пестицидах, нитритах и нитратах, нитрозаминах, группе канцерогенных соединений (главным образом полициклических ароматических углеводородов), радионуклидах, мышьяке. Наибольшую опасность с точки зрения интенсивности антропогенного воздействия представляют первые две группы токсикантов и радионуклиды.