Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему: Совершенствование методов анализа противотуберкулезных лекарственных средств

Автореферат диссертации по медицине на тему Совершенствование методов анализа противотуберкулезных лекарственных средств

На правах рукописи

Пантелеева Надеисда Михайловна

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ АНАЛИЗА ПРОТИВОТУБЕРКУЛЁЗНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Иркутский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Научный руководитель: доктор химических наук, профессор

Илларионова Елена Анатольевна

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Николаева Галина Григорьевна доктор химических наук, профессор Корчевин Николай Алексеевич

Ведущая организация: ГОУ ДПО «Иркутский государственный

институт усовершенствования врачей» Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Защита состоится «14» апреля 2011 г. в 10 00 час. на заседании диссертационного совета ДМ 003.028.02 при Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН

Автореферат разослан » и^Сс^Ь/НСл^ 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Одной из главных проблем современной медицины является профилактика и лечение туберкулёза. Это связано с увеличением заболеваемости населения в регионах со сложной социально-экономической обстановкой, появлением тяжелых форм туберкулеза со смертельным исходом (Zignol М., 2006; Якубов М.Р., 2007). В связи с этим возрастает потребность в качественных противотуберкулезных лекарственных средствах.

Эффективность и качество анализа лекарственных средств непосредственно связаны с использованием современных физико-химических методов исследования - слектрофотометрических, хроматографических, в том числе высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), которые обеспечивают высокую чувствительность, специфичность и экспрессность анализа.

Объектами настоящего исследования являются противотуберкулёзные лекарственные средства: производные пиразина, пиперазина, пиридина и натрия пара-аминосалицилат, которые представляют собой препараты первого и второго ряда и отмечены как наиболее эффективные (Мишин В.Ю., 2001).

Критический анализ данных литературы и нормативной документации показал, что методы количественного анализа указанной группы препаратов несовершенны и не позволяют объективно оценить их качество. Количественное определение лекарственных веществ исследуемой группы препаратов проводится химическими методами анализа: ацидиметрией в среде ледяной уксусной кислоты, нитритометрией (НД № 42-1305204; ФСП № 42-0173197501). Указанные методы являются длительными, токсичными, неселективными, что особенно важно в связи с проблемой фальсификации лекарственных средств. Исследование, проведенное Ассоциацией международных фармацевтических производителей, показало, что на фармацевтическом рынке России доля фальсифицированных противотуберкулёзных препаратов составляет около 30%. В последнее время выявляется большое количество фальсифицированных комбинированных противотуберкулёзных препаратов (Ушкалова Е. А., 2005).

В связи с вышеизложенным, разработка новых и совершенствование существующих методик анализа исследуемых препаратов с использованием современных физико-химических методов, позволяющих исключить прохождение контроля фальсифицированными препаратами, представляется актуальной задачей.

Целью настоящего исследования является совершенствование методов анализа однокомпонентных и многокомпонентных противотуберкулёзных лекарственных средств с использованием модифицированного варианта спектрофотометрии, отличающегося применением внешних образцов сравнения, и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

- осуществить выбор оптимальных условий спектрофотометрического определения рифампицина, пиразинамида, ломефлоксацина, этионамида, протионамида, пиридоксина гидрохлорида, натрия пара-аминосалицилата; разработать унифицированные методики количественного спектрофотометрического определения исследуемых лекарственных веществ в субстанциях и лекарственных формах с использованием внешних образцов сравнения;

- разработать методики определения теста «растворение» и однородности дозирования твердых дозированных лекарственных форм исследуемой группы препаратов спектрофотометрическим методом с использованием внешних образцов сравнения;

- обосновать условия хроматографического разделения изониазида, рифампицина и пиридоксина гидрохлорида; изониазида и пиразинамида; изониазида, пиразинамида и пиридоксина гидрохлорида методом высокоэффективной жидкостной хроматографии; разработать методики качественного и количественного определения многокомпонентных лекарственных форм «Тубавит», «Фтизопирам», «Фтизопирам+В6» с использованием метода ВЭЖХ;

- разработать проекты изменений ФСП на исследуемую группу препаратов.

Научная новизна работы:

Обоснованы и экспериментально подтверждены оптимальные условия спектрофотометрического анализа рифампицина, ломефлоксацина, пиразинамида, пиридоксина гидрохлорида, этионамида, протионамида и натрия пара-аминосалицилата (оптимальный растворитель, аналитическая длина волны, уравнение градуировочного графика), обеспечивающие максимальную воспроизводимость и правильность получаемых результатов.

Обоснован выбор внешних образцов сравнения ди метилового желтого, фенолфталеина, кислоты бензойной, калия феррицианида, калия хромата для спектрофотометрического анализа исследуемых противотуберкулёзных лекарственных средств.

Впервые разработан и экспериментально подтверждён модифицированный вариант спектрофотометрического анализа рифампицина, пиразинамида, ломефлоксацина, этионамида, протионамида, пиридоксина гидрохлорнда, натрия пара-аминосалицилата в субстанции и однокомпонентных лекарственных формах, основанный на применении внешних образцов сравнения; в результате проведенной валидационной оценки разработанных методик установлено наличие высокой воспроизводимости, точности, отсутствие систематической ошибки.

гидрохлорида; изониазида и пиразинамида; изониазида, пиразинамида и пиридоксина гидрохлорида методом ВЭЖХ.

Предложены и экспериментально подтверждены методики качественного и количественного определения многокомпонентных лекарственных форм «Тубавит», «Фтизопирам», «Фтизопирам+В6» с использованием метода ВЭЖХ; в результате проведенной валидационной оценки разработанных методик установлено наличие высокой воспроизводимости, точности, отсутствие систематической ошибки.

Практическая значимость работы:

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы обсуждались на: X, XI Международной школе-семинаре «Люминесценция и лазерная физика» (Иркутск, 2007, 2008); 62-й, 63-й, 64-й, 65-й межрегиональных конференциях по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2007, 2008, 2009, 2010); научной конференции «Естествознание и гуманизм» (2007, 2008); международной конференции «0птика-2007» (Санкт-Петербург, 2007); научно-практической конференции «Современные вопросы теории и практики лекарствоведения» (Ярославль, 2007); международной научной конференции «Оптика кристаллов и наноструктур» (Хабаровск, 2008); международной научно-практической конференции «Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании» (Белгород, 2008); научно-практической конференции «Фармация из века в век» (Санкт-Петербург, 2008); международной научно-практической конференции «Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства» (Шимкент, Казахстан, 2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 23 работы, в том числе 5 статей в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ, 1 монография, 4 Патента РФ на изобретения.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в

соответствии с планом научно-исследовательских работ ИГМУ по проблеме «Контроль качества лекарственных средств с использованием современных методов анализа» (номер Госрегистрации 01.91.0008620) и соответствует направлению проблемной комиссии по фармации и фармакологии.

Основные положения, выносимые на защиту:

-результаты выбора и обоснования оптимальных условий и внешних образцов сравнения для спектрофотометрического анализа рифампицина, пиразинамида, ломефлоксацина, этионамида, протионамида, пиридоксина гидрохлорида, натрия пара-аминосалицилата;

-разработанные унифицированные методики

спектрофотометрического анализа исследуемых противотуберкулёзных лекарственных средств с использованием внешних образцов сравнения и их валидационная оценка;

-результаты исследований по разработке методик анализа многокомпонентных лекарственных форм «Тубавит», «Фтизопирам», «Фтизопирам+В6» методом ВЭЖХ и их валидационная оценка.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 185 страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, 5 глав экспериментальной части, общих выводов, 60 таблиц, 36 рисунков, списка литературы, включающего 189 источника, из них 58 на иностранных языках. В приложении представлены таблицы экспериментальных данных, материалы по апробации и внедрению разработанных методик.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, определена научная и практическая значимость данной работы.

Первая глава представляет собой обзор отечественной и зарубежной литературы, нормативных документов, касающихся использования химических и физико-химических методов для контроля количественного определения в субстанциях и лекарственных формах исследуемых лекарственных средств, обладающих противотуберкулёзной активностью.

Во второй главе описаны объекты и методы исследований, используемые в диссертационной работе.

В третьей главе обоснованы условия спектрофотометрического определения производных пиразина и пиперазина - пиразинамида, рифампицина, ломефлоксацина, выбраны оптимальные внешние образцы сравнения (калия хромат, кислота бензойная, калия феррицианид) и разработаны методики количественного определения исследуемых препаратов в субстанциях и однокомпонентных лекарственных формах, а также методики определения теста «растворение» их твердых лекарственных форм. Представлена валидационная оценка разработанных методик и приведена их сравнительная оценка с методиками, представленными в нормативных документах на данные лекарственные средства.

Четвертая глава посвящена обоснованию условий спектрофотометрического определения производных пиридина - протионамида,

этионамида, пиридоксина гидрохлорида. В качестве внешних образцов сравнения выбраны диметиловый желтый, фенолфталеин, кислота бензойная, калия феррицианид. Разработаны методики количественного определения в субстанциях и однокомпонентных лекарственных формах, а также методики определения однородности дозирования и теста «растворение» их таблеток. Представлена валидационная оценка разработанных методик и приведена их сравнительная оценка с методиками нормативных документов на данные лекарственные средства.

В пятой главе обоснованы условия спектрофотометрического определения натрия пара-аминосалицилата, выбор калия хромата и калия феррицианида в качестве оптимальных внешних образцов сравнения и разработаны методики количественного определения натрия пара-аминосалицилата в субстанции и однокомпонентных лекарственных формах, а также методика определения теста «растворение» его твердых дозированных лекарственных форм. Представлена валидационная оценка разработанных методик.

Шестая глава посвящена разработке методик качественного и количественного определения многокомпонентных лекарственных форм «Тубавит», «Фтнзопирам» и «Фтизопирам+В6» методом ВЭЖХ. Разработаны условия хроматографического анализа: выбор колонки, сорбента, условий градиентного элюирования, подбор подвижной фазы, температуры, объема пробы. Проведена сравнительная валидационная оценка разработанных методик и методик нормативных документов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты и методы исследования

В работе использовали следующие методы исследования: спектроскопия в УФ- и видимой области спектра, электрохимические (рН-метрия), хроматографические (высокоэффективная жидкостная хроматография), статистические. При статистической обработке экспериментальных данных использовали методы Стьюдента и Фишера. Обработку экспериментальных данных и уравнений регрессии методом наименьших квадратов выполняли с использованием пакета «Microsoft Excel Professional for Windows XP».

Спектральные исследования проводили на спектрофотометрах СФ-26, СФ-46, СФ-56 (РФ), «Specord М-40» (Германия) в кварцевых кюветах с толщиной рабочего слоя 10 мм. рН растворов регулировали растворами 0,1 M натрия гидроксида и 0,1 M кислоты хлороводородной в пределах рН от 1,1 до 13,0. Значение рН контролировали с помощью мономера ЭВ-74 (РФ) со стеклянным индикаторным электродом. Электродом сравнения служил стандартный хлорсеребряный электрод. Растворимость таблеток определяли в приборе «Эрвека» (ФРГ) типа «вращающаяся корзинка». Хроматографические (ВЭЖХ) исследования проводили с использованием микроколоночного жидкостного хроматографа «Милихром А-02» (ЗАО

«ЭкоНова», Новосибирск, РФ) с ультрафиолетовым спектрофотометрическим детектором, снабженным стальной колонкой (75x2 мм), заполненной сорбентом Silasorb SPH С18 с размером частиц 5 мкм. Эффективность колонки - 4500 т.т. Температура колонки 35°С. Также использовали рН метр «Анион 4100» (РФ), ультразвуковую баню RK 100 «Bandelin electronic» (Германия).

Исследуемые образцы сравнения, а также используемые органические растворители, неорганические кислоты и щелочи отвечали требованиям ГОСТов и при необходимости подвергались дополнительной очистке по известным методикам.

Субстанции: изониазид, натрия пара-аминосалицилат, пиридоксина гидрохлорид, пиразинамид, этионамид, протионамид, ломефлоксацин, рифампицин; лекарственные формы: таблетки натрия пара-аминосалицнлата по 1,0 г, гранулы натрия пара-аминосалицилата по 4,0 г, таблетки пиридоксина гидрохлорида по 0,01 г, раствор для инъекций пиридоксина гидрохлорида 1%, таблетки пиразинамида по 0,5 г, таблетки ломефлоксацина по 0,4 г, капсулы рифампицина по 0,15 г и по 0,3 г, таблетки протионамида 0,25 г, таблетки этионамида по 0,25 г, таблетки «Тубавит», «Фтизопирам», «Фтизопирам+В6» отвечали требованиям НД.

Спектрофотометрическин анализ лекарственных средств,

производных пиразина, пиперазина, пиридина и натрия пара-аминосалицилата

Изучены спектры поглощения растворов пиразинамида, рифампицина, ломефлоксацина, протионамида, этионамида, пиридоксина гидрохлорида, натрия пара-аминосалицилата в интервале рН 1,1 - 13,0 в области длин волн 220 - 500 нм, их стабильность при хранении и обоснован выбор оптимальных условий спектрофотометрического определения исследуемых лекарственных средств (табл. 1).

Условия спектрофотомстрического определения лекарственных средств, производных пиразина, пиперазшш, пиридина и натрия пара-амшюсалицилата

Лекарственное вещество рН Растворитель Ьм, нм Образец сравнения Растворитель Оптимальная область поглощения, нм

Пиразинамид 12,5 O.lMNaOH 268 Калия хромат O.lMNaOH 264 - 286

1,1 0.IMHC1 268 Кислота бензойная 0JMHC1 266-280

Продолжение таблицы 1

Лекарственное вещество рн Растворитель Кщ, НМ Образец сравнения Растворитель Оптимальная область поглощения, нм

Ломефлоксацин 12,5 0,Ш NaOH 284 Калия хромат О.ШЫаОН 264-286

Протионамид 1,1 0,IM HCl 277 Кислота бензойная 0.1МНС1 266-280

277 Фенолфталеин 0.1МНС1 268-282

плечо 308 - 322 Ьиа 318 Диметиловый желтый ОДМ НС1 291 -334

Этионамид 1,1 0,IM HCl 277 Кислота бензойная 0.1МНС1 266-280

277 Фенолфталеин 0,1 МНС! 268-282

плечо 308-322 1анал318 Диметиловый желтый 0ДМНС1 291 -334

Пиридошша гилрохлорид 1,1 0,IM HCl 290 Калия феррицианид 0,1МНС1 290-316

12,5 0,1M NaOH 310 0,1М№ОН 290-316

Натрия пара-амино-салишшат 12,5 0,IM NaOH 264 Калия хромат 0,1М№ОН 264 - 286

298 Калия феррицианид 0,1М ЫаОН 290-316

Рифампицин 1,1 0,1 M HCl 266 Калия феррицианид 0,1МНС1 255 -267

Кислота бензойная 0,1М11С1 266-280

Выбор внешних образцов сравнения для спектрофотометрического анализа исследуемых лекарственных веществ осуществляли исходя из аналитической длины волны лекарственного вещества, оптимального растворителя и оптимальной области поглощения образца сравнения.

В качестве внешних образцов сравнения использовали вещества неорганической и органической природы: калия хромат, калия феррицианид, фенолфталеин, кислота бензойная, диметиловый желтый. Данные вещества широко применяются в аналитической практике в качестве реактивов, выпускаются химической промышленностью квалификации «хч» и «чда», доступны, дешевы, на них имеются ГОСТы, регламентирующие их качество, содержание в них основного вещества определяется химическими методами и составляет не менее 99,9%.

Оптические характеристики калия хромата, калия феррицианида, фенолфталеина, кислоты бензойной исследованы ранее (Илларионова Е.А., 2004). В данной работе была изучена возможность использования диметилового желтого в качестве внешнего образца сравнения для спектрофотометрического определения различных групп лекарственных средств в растворах при вариации рН от 1,0 до 13,0. Изучение спектров

поглощения и стабильности растворов диметилового желтого при различных значениях рН позволило установить оптимальные области рН для использования данного соединения в качестве внешнего образца сравнения в спектрофотометрическом определении лекарственных средств.

Были рассчитаны оптимальные области поглощения, в которых диметиловый желтый может быть использован в качестве внешнего образца сравнения в спектрофотометрическом анализе лекарственных средств. Области поглощения определены на основании разработанной ранее (Илларионова Е.А., 2004) методологии выбора внешних образцов сравнения. Основные оптические характеристики полос поглощения диметилового желтого при оптимальных значениях рН и рассчитанные области поглощения представлены в табл. 2.

Оптические параметры полос поглощения диметилового желтого

Образец сравнения рн Растворитель Максимум поглощения, нм Полуширина, им Область поглощения, им

Диметиловый желтый «ч. д. а.» ГОСТ 4679-51 1,1 0,1 МНС1 318 516 7 32 291 -334 488 - 550

6,95 Спирт этиловый 95% 254 408 6 28 246-261 391 -436

Оптимальные области поглощения диметилового желтого, установленные расчетным способом, были подтверждены экспериментально. Для этого изучали зависимость погрешности измерения величины оптической плотности диметилового желтого при различных длинах волн в области, соответствующей половине полуширины его полос поглощения. На рисунке 1 представлена данная зависимость в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной в интервале 291-334 нм.

Рис. 1. Зависимость погрешности измерения оптической плотности диметилового желтого от длины волны в интервале 291 - 334 нм

Из рисунка видно, что ошибки измерения величины оптической плотности находятся в пределах 0,3-1,5%, что укладывается в допустимую для спектрофотометрии погрешность. Следует отметить, что погрешность измерения величины оптической плотности наименьшая в области максимума поглощения и наибольшая при длинах волн, соответствующих верхнему и нижнему значению интервала. За пределами границ оптимального интервала погрешность измерения величины оптической плотности возрастает до 1,8% и выше. Таким образом, экспериментально подтверждено, что ошибки измерения величины оптической плотности диметилового желтого в пределах оптимального интервала укладываются в допустимую для спектрофотометрического анализа лекарственных средств погрешность.

Из таблицы 1 видно, что аналитическая длина волны этионамида при рН 1,1 (277 нм) входит в интервал, оптимальный для фенолфталеина (268-282 нм). В качестве примера на рисунке 2 представлены спектры поглощения этионамида и фенолфталеина в оптимальных условиях. Видно, что спектры поглощения этионамида и фенолфталеина имеют сходный характер в области аналитической длины волны этионамида. Это дает основание предполагать, что фенолфталеин является оптимальным внешним образцом сравнения для спектрофотометрического определения этионамида при использовании в качестве растворителя 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной.

Рис. 2. Спектры этионамида и фенолфталеина в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной

Из рисунка 2 видно, что спектры поглощения лекарственного вещества и внешнего образца сравнения различаются по интенсивности поглощения, в связи с чем вводится коэффициент пересчета

являющийся отношением удельных показателей поглощения внешнего ЕШ1С и рабочего Еос образцов сравнения. Введение в расчетную формулу коэффициента пересчета позволяет учесть различия в природе матриц испытуемого вещества и внешнего образца сравнения.

На основании установленных оптимальных условий спектрофотометрического определения исследуемой группы препаратов были разработаны унифицированные методики количественного определения действующих веществ с применением внешних образцов сравнения в субстанциях и готовых лекарственных формах.

Результаты спектрофотометрического определения исследуемых лекарственных веществ и их готовых лекарственных форм с применением внешних образцов сравнения и рабочих образцов сравнения (PCO), а также их сравнительная оценка представлены в таблицах 3,4.

Метрологические характеристики методик спектрофотометрического определения исследуемых лекарственных веществ с применением внешних образцов

Лекарственное вещество, № серии Образцы сравнения Метрологические характеристики (п

X, % S2 S SJ ЛХ Е, % S,

Рифампшшн 250907 Кислота бензойная 100,42 0.7186 0,8477 0,2681 0,6060 0,60 0,008

Калия феррицианид 100,56 0.2278 0.4773 0,1509 0,3400 0.34 0,005

PCO 100,40 0.1369 0.3701 0,1404 0,3400 0,34 0,004

Пиразинамид 181207 Калия хромат 99,51 0,1652 0,40644 0,12853 0,2905 0,29 0,004

Кислота бензойная 99,58 0,2058 0,45370 0,14347 0,3242 0,33 0,005

PCO (pH 1,1) 99,55 0,17887 0,42290 0,1337 0,3022 0,30 0,004

Ломефлоксацин 121007 Катая хромат 100,78 0.4365 0,6607 0,2089 0,4722 0.47 0,005

PCO 100,18 0.6241 0.7900 0,2498 0,5646 0.56 0,008

Протионамид 161107 Фенолфталеин 100,44 0,0189 0.1376 0.0435 0,0980 0,10 0,001

Кислота бензойная 100,36 0.14140 0.3760 0.1189 0,2687 0,27 0.004

Димет иловый желтый 100,53 0,0077 0,0879 0,0278 0,0630 0,10 0,001

PCO 100,40 0.13690 0.3701 0.1404 0,3401 0,34 0,004

Этионамнд 23И07 Фенолфталеин 99.89 0,10390 0.3223 0.1019 0.2303 0,23 0.003

Кислота бензойная 99.95 0,38960 0,6242 0.1974 0,4460 0,45 0.006

Диметиловый желтый 99,68 0,2242 0,4735 0,1497 0,3384 0,34 0,005

PCO 99,96 0,1045 0.3232 0.1022 0.2310 0,23 0,003

Пиридоксина гидрохлорид 280907 Калия феррицианид (pHl.l) 100,00 0,03373 0,18366 0,05808 0,1313 0,13 0,002

Калия феррицианид (рН12,1) 100,07 0,01823 0,1350 0,04270 0,0965 0,10 0,001

РСО(рН 1,1) 100,07 0,03723 0.1929 0,06101 0,1379 0,14 0,002

Натрия пара-аминосалицилат 151006 Катя хромат 99,98 0,00003 0,0056 0,0018 0,0040 0,40 0,006

Калия феррицианид 99,96 0,00005 0,00737 0,0023 0,0052 0,53 0,007

PCO 99,92 0,00005 0,00726 0,0023 0,0052 0,52 0,007

Спектрофотометрическое определение исследуемых лекарственных веществ в лекарственных формах

Лекарственная форма № серии Образцы сравнения Метрологические характ еристики (п=10, F-95%)

Капсулы рифампншша по 0,15 г 141007 Кислота бензойная 99,86 0,00006 0,0081 0,0025 0,0057 1,15 0,020

Калия феррициаиид 99,94 0,00007 0,0081 0,0025 0,0057 1,16 0,020

PCO 99,61 0.00009 0,0029 0,00110 0,003 1,08 0.012

Капсулы рифампицина по 0,3 г 090198 Кислота бензойная 99,13 0,00002 0,0046 0,00144 0,0033 1,10 0,016

Калия феррициаиид 99,85 0,00004 _ 0,0061 0,0019 0,0043 1,70 0,024

PCO 99,40 0,00005 0,0070 0,0022 0,005 2,00 0,028

Таблетки пиразинамида по 0,5 г 071206 Калия хромат 97,20 0,00011 0,0102 0.00323 0,0073 1,50 0,021

Кислота бензойная 97,00 0,00005 0,0072 0,00229 0,0052 1,07 0,015

PCO (pH 1,1) 97.60 0,00011 0,0106 0.00335 0,0076 1,55 0,022

Таблетки ломефлоксацина по 0,4 г 061006 Калия хромат 99,40 0,00011 0.0107 0.00337 0,0076 1,91 0,027

PCO 99,24 0,00011 0,0104 0,0033 0,0074 1,88 0,026

Таблетки протионамида по 0,25 г 141007 Фенол фталенн 101,14 0,00003 0,0056 0,00177 0,0040 0.99 0,014

Кислота бензойная 101,00 0,00002 0,0048 0,0015 0,00344 1,36 0,019

Диметиловый желтый 101,24 0,00001 0,0032 0,00103 0,00232 0,92 0,013

PCO 101,2) 0,00006 0,00749 0,00237 0,0054 1.32 0,019

Таблетки этионамида по 0,25 г 281107 Фенолфталеин 99,40 0.00001 0,0024 0.00075 0,0017 0,7 0,010

Кислота бензойная 99,94 0,00007 0,0081 0,0025 0,0057 1,16 0,020

Диметиловый желтый 99,88 0,00001 0,0028 0,00088 0,00200 0,8 0,011

PCO 99,61 0,00001 0,0029 0,00110 0.003 1,08 0,012

Таблетки пиридоксина гидрохлорида по 0,01 г 071206 Калия феррициаиид (pHl.l) 101,80 0,0000001 0,0003 0,00010 0,00022 2,18 0,031

калия феррициаиид (рН12,1) 102,00 0,0000002 0,0004 0,00013 0,00029 1,26 0,040

PCO (pH 1.1) 102.60 0,00000006 0,0003 0.00008 0,00018 1.75 0,024

Раствор пиридоксина гидрохлорида 1% 110 1 мл 071206 Калия феррициаиид (рН1,П 99,90 0,00000002 0,0004 0,00001 0,0003 1,27 0,041

Калия феррициаиид (рНШ) 99,91 0,00000001 0,0001 0,00003 0,00006 0,61 0,086

PCO(pHl.l) 99,57 0,00000004 0,0001 0,000045 0,000101 1.01 0.011

Таблетки натрия пара-аминосалицилата по 1,0 г 141007 Калия хромат 99,86 0,00006 0.0081 0,0025 0.0057 1,15 0,020

Калия феррициаиид 99,94 0,00007 0,0081 0,0025 0,0057 1,16 0,020

PCO 99,61 0,000009 0,0029 0,00110 0,003 1,08 0,012

Гранулы иара-аминосалицилата 4.0 г 090108 Калия хромат 80,40 0,3864 0,6216 0,1966 0,4442 0.56 0,008

Калия феррициаиид 80,08 0,3797 0,6162 0,1999 0,4404 0,55 0,008

PCO 80,48 0.2223 0,4715 0,1491 0,3370 0.50 0,006

Результаты, полученные с использованием разных внешних образцов сравнения и PCO, являются сопоставимыми. Относительная погрешность определения не превышает 0,60% для субстанций и 2,18% для готовых лекарственных форм.

Следует отметить, что результаты количественного определения одного лекарственного вещества по разным внешним образцам сравнения хорошо согласуются, поэтому в условиях заводских лабораторий и Центров контроля качества лекарственных средств можно применять наиболее доступный внешний образец сравнения для данной лаборатории из указанных в нормативном документе.

В работе была проведена сравнительная оценка разработанных методик с методиками нормативной документации. Результаты сравнительной оценки разработанных -и -рекомендованных НД методик количественного определения лекарственных веществ (на примере рифампицина) и лекарственных форм (на примере таблеток этионамида) представлены в таблицах 5 и 6.

Сравнительная оценка методик количественного определения рифампицина (п=10,

t(P, 0(табл)=2,26; Р=95%; F(P, f„ Г2)(тавл)=4,85; Р=99%)

Методика И X,% S2 S Е,% ^ШЧ FBU4 Продолжительность анализа, мин Число операций

Спектрофотомет-рия по удельному показателю поглощения 100 97,95 20,10 4,483 3,27 1,44 27,97 20 5

Спектрофотометр™ по кислоте бензойноП 100 100,42 0,7186 0,848 0,6 1,57 20 6

Сравнительная оценка методик количественного определения таблеток этионамида по 0,25 г (n=10, t(P, 1)(Таб.1)=2,26; Р=95%; F(P, f,, fI)(Ta6jl,=4,85; Р=99%)

Методика Ii X,% S3 S Е,% ^выч Продолжительность анализа, мин Число операций

Спсктрофотометрия по PCO 100 100,28 0,00882 0,0028 2,5 0,25 5,9 60 16

Спектрофотометр™ по диметиловому желтому 100 100,20 0,000013 0,0036 1,04 0,44 20 6

Приведенные результаты показывают, что методики спектрофотометрического определения и методики, рекомендованные нормативной документацией, дают правильные результаты (1вь1Ч<1,абл). Из таблицы 5 видно, что результаты определения рифампицина, полученные по разработанной методике и методике нормативного документа, не согласуются. Заниженные результаты определения субстанции рифампицина по методике НД дают основание предполагать, что значения удельных

показателей поглощения, рассчитанные по результатам измерений на различных приборах, не воспроизводятся. Сравнение дисперсий двух выборочных совокупностей при помощи Р-распределения при ^=^=10, р=99% показало, что для субстанции Рзкс„27,97 при Ртздл-4,85, следовательно, метод НД уступает предложенному (Рвыч>Ртабл) по воспроизводимости.

Из таблицы 6 видно, что сравнение дисперсий двух выборочных совокупностей при помощи Р-распределения при ^=^=10, р=99% показало, что для таблеток этионамида Рэкс=5,9 при Рта6л=4,85. Следовательно, воспроизводимость разработанной методики выше воспроизводимости методики нормативной документации. По продолжительности анализа разработанная методика определения таблеток этионамида менее длительна, чем методика НД, в связи с отсутствием необходимости длительного процесса -экстрагирования этионамида из таблеточной массы спиртом метиловым в делительной воронке.

Преимуществом разработанных методик является возможность унификации количественного определения исследуемых лекарственных средств в субстанциях и лекарственных формах.

Проведенная валндашшнная оценка разработанных методик спектрофотометрического определения исследуемых лекарственных средств в субстанциях и лекарственных формах свидетельствует о пригодности предложенных методик. Результаты валидационной оценки методик спектрофотометрического определения на примере пиразинамида в субстанции и таблетках представлены в таблице 7.

Результаты вашдационной оценки методик спектрофотометрического определения ниразннамида по внешнему образцу сравнения калия хромату

Параметры Критерии приемлемости Результаты испытания

Правильность Процент восстановления,% 99,89 99,64

1.Сходимость ИЭО < 2%, 1,;,Г„> 1щ, ЮТ = 0,54 и, =0,80 (»„а, =2,45), п=7 ИЗО =1,87 1»,™= 1,16, (»■«■»=2,45), п=7

2.Воспроизводимость ИЖ < 3%, ^табл Ьыч ЯБО -0,62 1«Ы,= 1,70, (1^=2,45), п=7 1^0 =1,70 «Ш,= 1,17, Отайп =2,45), п-1

Специфичность Специфична Специфична

Линейность результатов 0,999 II- = 0,999; у=0,061х-0,018 Я2 = 0,999; у=0.062х + 0.017

Аналитическая область методики Интервал концентраций 2-20 мкг/мл 2-20 мкг/мл

Разработанные методики спектрофотометрического определения с использованием внешних образцов сравнения позволили с достаточной точностью провести определение однородности дозирования и теста

«растворение» твердых дозированных лекарственных форм исследуемой группы препаратов.

Методики спектрофотометрического определения с использованием внешних образцов сравнения апробированы на фармацевтическом предприятии ОАО «Фармасинтез» и внедрены в практику работы кафедры фармацевтической и токсикологической химии ИГМУ. Их научная новизна подтверждена 4 Патентами РФ на изобретения.

Разработка методик количественного определения многокомпонентных лекарственных форм, содержащих изониазид, пиразинамид, рифампнции и пиридоксина гидрохлорид

В - ^данной работе изучена возможность анализа отечественных многокомпонентных лекарственных форм противотуберкулёзного действия «Тубавит», «Фтизопирам» и «Фтизопнрам+В6» при помощи оборудования российского производства ВЭЖХ-анализатора «Милихром А-02». Состав действующих веществ исследуемых многокомпонентных форм представлен в таблице 8.

Состав исследуемых многокомпонентных лекарственных форм

Исследуемая многокомпонентная лекарственная форма Действующие вещества

Таблетки «Тубавит» Изониазид 0,10 г, рифампицин 0,15 г, пиридоксина гидрохлорид 0,01 г

Таблетки «Фтизопирам» Изониазид 0,15 г, пиразинамид 0,5 г

Таблетки «Фтизопирам+В,,» Изониазид 0,15 г, пиразинамид 0,5 г, пиридоксина гидрохлорид 0,015 г

Для анализа был выбран обращенно-фазный вариант хроматографии. Условия хроматографирования, установленные экспериментально, представлены в таблицах 9, 10.

Условия хроматографирования изомиазила, пиридоксина гидрохлорида и рнфампицииа в таблетках «Тубавит»

Прибор «Милихром А-02»

Колонка 75x2 мм, Силасорб Cía (05 мкм)

Подвижная фаза злюент А — кислота ортофосфорная (рН 3,0), элюент Б - ацетонитрил

Скорость потока 150 мкл/мин

Объем пробы 2 мкл

Время анализа, мин 15

Температура термостата колонки 35 °С

Градиент А : Б 100 : 0% (1-5 мин). 100 : 0—>25 : 75% (5-15 мин)

При хроматографировании таблеток «Тубавит» время удерживания изониазида составляет 1,2 минуты, пиридоксина гидрохлорида - 3 минуты, рифампицина -13 минут.

Условия хроматографировании изониазида, пиридоксина гидрохлорида и рифампицина в таблетках «Фтизопирам» и «Фтизопирам+В«»

Лекарственная форма Фтизопирам | Фтизопирам+Вс,

Прибор «Мшшхром А-02»

Колонка 75x2 мм, Силасорб С)Я (о5 мкм)

Подвижная фаза элюент А - кислота ортофосфорная (рН 3,0). элюент Б - ацетоиитрил

Скорость потока 150 мклАши

Объем пробы 2 мкл

Время анализа, мин 12

Температура термостата колонки 35 °С

Градиент А : Б 100 : 0 % 65 : 35% (1-12 мин)

При хроматографировании таблеток «Фтизопирам» и «Фтизопирам+Вб» время удерживания изониазида составляет 2,5 минуты, пиразинамида - 6,5 минут, пиридоксина гидрохлорида - 4,0 минуты. Хроматограмма стандартного раствора для хроматографического определения на примере таблеток «Фтизопирам» представлена на рисунке 3.

1 2 3 _4 5 6 7___8 9 10 11 мин

Рис. 3. Хроматограмма стандартного раствора изониазида 0,003 г/мл (1) и пиразинамида 0,01 г/мл (2).

Результаты количественного определения таблеток «Тубавит», «Фтизопирам», «Фтизопирам+В6», полученные по разработанной методике методом ВЭЖХ, приведены в таблице 11.

Результаты количественного определения таблеток «Тубавит», «Фтизопирам»,

Лекарственная форма, серия Содержание в лекарственной форме, г А', г Метрологические характеристики (п=7, Р=95%)

Тубавит 110408 Изониазид, 0,10 0,0996 100,12 0,0000064 0,00250 0,0008 0,0018 1,80 0,025

Рифам пицин, 0,15 0,1503 100,22 0,0000100 0,00320 0,0010 0,0023 1,52 0,021

Пиридоксииа гидрохлорид 0,01 0,0100 99,61 0,0000068 0,00026 0,0001 0,0002 1,87 0,026

Фтизопирам 241208 Изониазид, 0,15 0,1492 99,46 0,0000120 0,00345 0,0011 0,0025 1,65 0,023

Пиразинамид 0,50 0,5026 100,52 0,0001480 0,01215 0,0038 0,0086 1,73 0,024

Фтизопи-рам+В6 250109 Изониазид 0,15 0,1511 100,71 0,0000125 0,00354 0,0011 0,0025 1,68 0,023

Пиразинамид 0,50 0,5026 100,52 0,0001340 0,02259 0,0037 0,0083 1,64 0,023

Пиридоксина гидрохлорид 0,015 0,0149 99,28 0,0000001 0,00035 0,0001 0,0003 1,68 0,023

Проведенная сравнительная оценка разработанных методик и методик нормативной документации показала, что разработанные методики и методики НД дают правильные результаты (1:ВЬ1Ч<1:Ш-Л) и не различаются по воспроизводимости (Г:'1!ич<Ртабл), поэтому разработанные методики можно предложить в качестве альтернативных методикам НД. Основными достоинствами разработанных методик являются использование отечественного оборудования, доступных для большинства лабораторий отечественных реактивов, простота приготовления испытуемых и стандартных растворов и подвижных фаз.

Результаты сравнительной оценки разработанной методики и методики НД количественного определения таблеток «Фтизопирам+В6» представлены в таблице 12.

Сравнительная оценка методик количественного определения таблеток «Фтизопирам+Вб» (п=10,1(1', П(та6л)=2,26; Р=95%; Р(Р, Г„ Г2)<таЫ)=4,85; Р=99%)

Методика Лекарственное вещество Л\% Б Е% ^ПЫЧ ^»ич Продолжительность анализа

Разработанная методика Изониазид 100,28 0,0000090 0,00299 1,42 0,4231 1,60 12 мин

Пиразинамид 100,90 0,0001220 0,01106 1,57 1,2867 1,02

Пирндоксина гидрохлорид 101,72 0,0000002 0,00038 1,79 2,1470 0,87

Методика нд Изониазид 100,30 0,0000144 0,00379 1,80 0,3776 1,6 20 мин

Пиразинамид 100,84 0,0001250 0,01116 1,58 1,1897 1,02

Пирндоксина гидрохлорид 101,49 0,0000001 0,00036 1,70 1,9460 0,87

Результаты валидационной оценки методики количественного определения на примере таблеток «Тубавит» представлены в таблице 13.

Валидаинопная оценка хроматографнчеекон методики количественного определения таблеток «Тубавит»

Параметры Критерии приемлемости Таблетки «Тубавит»

Изониазид Рифампицин Пирндоксина гидрохлорнд

Правильность Процент восстановления,0/» 98-102% 99,63 99,93 100,80

Сходимость ЯБО < 2,0% ^габл — ^выч 1*80=1,70; С™, = 0,19, (^,=2,45), п=7 1*80=1,55; 1™, = 0,72, Лабл =2,45), п=7 1*80=1,54; = 1,13, (и* =2,45), п=7

Воспроизводимость 1*80 <2,0% ^табл — ^выч ЯБ 0=1,91; и« = 0,62, (^тайл =2,45), п=7 1*80=1,86; 1шч = 0,38, (1^=2,45), п=7 1*50=1,87; и, = 1,02, 0гайа=2,45), 11=7

Линейность 0,999 ¡^ = 0,999; \;

5673х - 0.105 Я1 = 0,999; >=65,75х-0,837 Я2 = 0,999; у=2549х-0,153

Робастность 1 .Изменение рН буфера на ± 0.25 2.Пзменеиие температуры колонки на ± 5°С З.Разные колонки 4.Отклонения скорости градиента* 10% Времена удерживания не изменяются Времена удерживания не изменяются Времена удерживания не изменяются

Проведенная валидационная оценка разработанных методик количественного определения исследуемых многокомпонентных

лекарственных форм методом ВЭЖХ свидетельствует о пригодности

1. Обоснованы оптимальные условия спектрофотометрического определения пиразинамида, протионамида, этионамида, натрия пара-аминосалицилата, рифампицина, ломефлоксацина, пиридоксина гидрохлорида: оптимальные значения рН, растворитель, аналитическая длина волны, уравнение градуировочного графика, выбор внешних образцов сравнения. Установлено, что для количественного определения указанных препаратов методом спектрофотометрии возможно использование нескольких внешних образцов сравнения, что позволит аналитическим лабораториям-осуществлять выбор образцов сравнения.

2. Разработаны унифицированные методики спектрофотометрического количественного определения пиразинамида, протионамида, этионамида, натрия пара-аминосалицилата, рифампицина, ломефлоксацина, пиридоксина гидрохлорида в субстанциях и однокомпонентных лекарственных формах с использованием внешних образцов сравнения; погрешность определения для субстанции не превышает 0,84%, для лекарственных форм - 2,18 %. При сравнительной оценке предложенных методик с методиками, рекомендованными НД, установлено, что методики НД уступают по точности и воспроизводимости методикам спектрофотометрического определения по внешним образцам сравнения, которые отличаются доступностью, экспрессностью и отсутствием высокотоксичных реактивов.

3. Разработаны методики определения теста «растворение» и однородности дозирования твердых дозированных лекарственных форм исследуемой группы препаратов методом спектрофотометрии с использованием внешних образцов сравнения. Показано, что указанные методики позволяют провести эффективную биофармацевтическую оценку данных лекарственных форм, а также отличаются экспрессностью и доступностью.

4. Обоснованы условия хроматографического разделения изониазида, рифампицина и пиридоксина гидрохлорида; изониазида и пиразинамида; изониазида, пиразинамида и пиридоксина гидрохлорида (колонка, сорбент, условия градиентного элюирования, подвижная фаза, температура, объем пробы) методом ВЭЖХ. На основании установленных условий разработаны унифицированные методики количественного определения указанных субстанций в таблетках «Тубавнт», «Фтизопирам», «Фтизопирам+В6» методом ВЭЖХ. Относительная погрешность определения не превышает 2,04%.

5. Разработаны проекты изменений ФСП на исследуемые лекарственные средства по показателям «Подлинность», «Растворение», «Однородность дозирования» и «Количественное определение».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Пантелеева, Н.М. Количественное определение пиридоксина гидрохлорида спектрофотометрическим методом / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова // Естествознание и гуманизм: сб. науч. работ. -Томск, 2007. - Т.4, № 3. - С. 127.

2. Пантелеева, Н.М. Спектрофотометрическое определение пиразинамида. / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова, Е.М. Артасюк, И.П. Сыроватский // Сибирский медицинский журнал. - 2007. -Т.71, № 4. - С.48-51.

3. Пантелеева, Н.М. Оптические эталоны для спектрофотометрического анализа лекарственных средств / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова, А.И. Илларионов, О.Л. Никонович // Труды X Международной школы----семинара «Люминесценция и лазерная физика». - Иркутск: ИГУ, 2007.

4. Пантелеева, Н.М. Оптическое исследование 2-пропил-тиокарбомоил-4 пиридина / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский, Е.М. Артасюк // Оптика - 2007: сб. тр. V Междунар. конф. - СПб., 2007.-С. 192-193.

5. Пантелеева, Н.М. Спектрофотометрическое определение натрия пара-аминосалицилата / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский // Современные вопросы теории и практики лекарствоведения: сб. материалов науч.-практ. конф. - Ярославль, 2007. - С.264-267.

6. Пантелеева, Н.М. Исследование возможности применения диметилового желтого в качестве образца сравнения в спектрофотометрии / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова // Фармация из века в век: сб. науч. трудов. Ч. 111. Анализ и стандартизация лекарственных средств. - СПб.: Изд-во СПХФА, 2008. - С. 111-114.

7. Пантелеева, Н.М. Разработка унифицированной методики анализа трехкомпонентной лекарственной формы, содержащей изониазид, пиразинамид и рифампицин методом высокоэффективной жидкостной хроматографии / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2008. - Вып. 63. - С. 316-317.

8. Пантелеева, Н.М. Количественное определение рифампицина спектрофотометрическим методом / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова // Сибирский медицинский журнал. - 2008. - Т.81, № 6. -С. 69-72.

9. Пантелеева, Н.М. Спектрофотометрическое определение протионамида методом внешнего стандарта / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова // Сб. матер. Международной науч.-практ. конф. - Белгород, 2008. - С. 229-233.

Ю.Пантелеева, Н.М. Количественное определение 1-этил-6,8-дифтор-7-(Зметил-1-пиперазинил)-4-оксохинолин-карбоновой кислоты

спектрофотометрическим методом / Н.М. Пантелеева, Е.А.

Илларионова, И.П. Сыроватский, O.JI. Никонович // Изв. вузов. Сер. Химия и хим. технология. - 2008. - Т. 51, вып. 12. - С. 6-9.

11 .Пантелеева, Н.М. Новый вариант спектрофотометрического определения этионамида / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова, O.JI. Никонович // Труды XI Международной школы-семинара «Люминесценция и лазерная физика». - Иркутск: ИГУ, 2008 г. - С. 8384.

12.Пантелеева, Н.М. Спектрофотометрическое определение 2-метил-З-окси-4,5ди-(оксиметил)-пиридина гидрохлорида по оптическому образцу сравнения калия феррицианиду / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова, O.JL Никонович // Сб. матер. Международной науч. конф. -Хабаровск,2008.-С. 121-125. .

—>3-.Пантелеева, Н.М. Исследование оптических свойств этионамида / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова, O.JI. Никонович // Естествознание и гуманизм: сб. науч. работ. - Томск, 2008. - Т.5, №13. - С. 25-26.

Н.Пантелеева, Н.М. Количественное и качественное определение изониазида, пиразииамида, рифампицина и пиридоксина гидрохлорида с помощью хроматографического и спектрофотометрического методов анализа при совместном присутствии / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2009. - Вып. 64.-С. 320-322.

15.Пантелеева, Н.М. Определение теста «растворение» таблеток ломефлоксацина спектрофотометрическим методом с использованием внешнего образца сравнения калия хромата / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова П Сибирский медицинский журнал. - 2009. - Т.87, № 4. -С. 49-51.

16.Пантелеева, Н.М. Определение однородности дозирования таблеток пиридоксина гидрохлорида / Н. М. Пантелеева, Е. А. Илларионова // Сб. матер. Международной науч.-практ. конф. - Шимкент, 2009. - Т. 1. - С. 145-148.

17.Пантелеева, Н.М. Определение теста «растворение» таблеток пиразииамида с использованием внешнего образца сравнения калия хромата или кислоты бензойной / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2010. - Вып. 65. - С. 370-372.

18.Пантелеева, Н.М. Анализ многокомпонентной противотуберкулёзной лекарственной формы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии / Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова // Сибирский медицинский журнал. - 2010. - Т. 96, № 5. - С. 52-54.

19.Илларионова, Е.А. Хроматографический анализ органических лекарственных средств / Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский, Н.М. Пантелеева, Е.М. Артасюк. - Иркутск, 2010. - 127 с.

20.Пат. № 2389012, Российская Федерация МПК А61К 31/498. Способ определения этионамида / А.И. Илларионов, Н.М. Пантелеева,

Е.А. Илларионова, О.Л. Никонович; Заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО ИрГУПС (ИрИИТ). - №20081117552/15; заявл. 30.04.2008, опубл. 10.05.2010, Бюл. №13. - 6 с.

21.Пат. № 2390016, Российская Федерация МПК А61К 31/498. Способ определения рифампицина / А.И. Илларионов, Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова, О.Л. Никонович; Заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО ИрГУПС (ИрИИТ). - № 2008124574/15; заявл. 16.06.2008, опубл. 20.05.2010, Бюл. № 14. - 8 с.

22.Пат. № 2394226, Российская Федерация МПК А61К 31/498. Способ определения пиразинамида / А.И. Илларионов, Н.М. Пантелеева, Е.А.Илларионова; Заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО ИрГУПС (ИрИИТ). - № 2008124756/15; заявл. 16.06.2008, опубл. 10.07.2010, Бюл. № 19. - 8 с.

23.Пат. № 2399049, Российская Федерация МПК А61К 31/196. Способ определения натрия пара-аминосалицилата / А.И. Илларионов, Н.М. Пантелеева, Е.А. Илларионова; Заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО ИрГУПС (ИрИИТ). - № 2008135581/15; заявл. 02.09.2008, опубл. 10.09.2010, Бюл. № 25. - 10 с.

Подписано в печать 01.03.11. Формат 60x84/16. Тираж 120 экз. Усл. печ. л. 1,5. Заказ 248

Типография Издательства РУДН 117923, ГСП-1, г. Москва, ул. Орджоникидзе, д.З

Оглавление диссертации Пантелеева, Надежда Михайловна :: 2011 :: Улан-Удэ

ЧАСТЫ. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. МЕТОДЫ АНАЛИЗА НЕКОТОРЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ОБЛАДАЮЩИХ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ.

1.1.Анализ изониазида в субстанции и лекарственных формах.

1.2.Анализ пиридоксина гидрохлорида в субстанции и лекарственных формах.

1.3 .Анализ натрия пара-аминосалицилата в субстанции и лекарственных формах.

1.4.Анализ пиразинамида в субстанции и лекарственных формах.

1.5.Анализ этионамида и протионамида в субстанции и лекарственных формах.

1.6.Анализ ломефлоксацина в субстанции и лекарственных формах.

1.7.Анализ рифампицина в субстанции и лекарственных формах.

ЧАСТЬ II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты и методы исследования.

2.2. Общие методики, используемые в работе.

ГЛАВА 3. СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ПРОИЗВОДНЫХ ПИРАЗИНА И ПИПЕРАЗИНА

3.1. Изучение возможности определения рифампицина и пиразинамида спектрофотометрическим методом.

3.2.Разработка условий и результаты спектрофотометрического анализа рифампицина в субстанции и лекарственных формах.

3.3. Разработка условий и результаты спектрофотометрического анализа пиразинамида в субстанции и лекарственных формах.

3.4. Разработка условий и результаты спектрофотометрического анализа ломефлоксацина в субстанции и лекарственных формах.

3.5. Биофармацевтические исследования лекарственных форм рифампицина, пиразинамида, ломефлоксацина.

Выводы по главе.

ГЛАВА 4. СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ПРОИЗВОДНЫХ ПИРИДИНА

4.1. Разработка условий и результаты спектрофотометрического анализа протионамида и этионамида в субстанции и лекарственных формах.

4.2. Разработка условий и результаты спектрофотометрического анализа пиридоксина гидрохлорида в субстанции и лекарственных формах.

4.3. Определение однородности дозирования таблеток пиридоксина гидрохлорида по 0,01 г.

4.4. Биофармацевтические исследования лекарственных форм протионамида, этионамида и пиридоксина гидрохлорида.

Выводы по главе.

ГЛАВА 5. СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НАТРИЯ ПАРА-АМИНОСАЛИЦИЛАТА

5.1.Изучение возможности определения натрия пара-аминосалицилата титриметрическим методом.

5.2. Разработка условий и результаты спектрофотометрического анализа натрия пара-аминосалицилата в субстанции и лекарственных формах.

5.3. Биофармацевтические исследования лекарственных форм натрия пара-аминосалицилата.

Выводы по главе.

ГЛАВА 6. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНОГО ДЕЙСТВИЯ

6.1 .Разработка условий хроматографического анализа многокомпонентных лекарственных форм «Тубавит», «Фтизопирам» и «Фтизопирам+Вб».

6.2. Количественное определение таблеток «Тубавит», «Фтизопирам» и «Фтизопирам+Вб» хроматографическим методом.

Выводы по главе.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Пантелеева, Надежда Михайловна, автореферат

Актуальность темы. Одной из главных проблем современной медицины является профилактика и лечение туберкулёза. Это связано с увеличением заболеваемости населения в регионах со сложной социально-экономической обстановкой, появлением тяжелых форм туберкулеза со смертельным исходом [2, 130, 181]. В связи с этим возрастает потребность в качественных противотуберкулезных лекарственных средствах.

Эффективность и качество анализа лекарственных средств непосредственно связаны с использованием современных физико-химических методов исследования - спектрофотометрических, хроматографических, в том числе высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), которые обеспечивают высокую чувствительность, специфичность и экспрессность анализа.

Объектами'настоящего исследования являются противотуберкулёзные лекарственные средства: производные пиразина, пиперазина, пиридина и натрия пара-аминосалицилат, которые представляют собой препараты первого и второго ряда, которые отмечены как наиболее эффективные [90].

В последние годы всё чаще для«' лечения туберкулёза применяются многокомпонентные лекарственные формы. Сочетание изониазида, пиразинамида и рифампицина обеспечивает бактерицидный и «стерилизующий» эффект в зоне туберкулёзного воспаления пораженного органа в начальной фазе краткосрочной химиотерапии [109].

Критический анализ данных литературы и нормативной документации показал, что методы количественного определения указанной группы препаратов несовершенны и не позволяют объективно оценить их качество. Количественное определение субстанций ломефлоксацина, пиразинамида, этионамида, протионамида, пиридоксина ацидиметрией в среде ледяной уксусной кислоты [59, 83, 87, 89, 128], натрия пара-аминосалицилата -нитритометрией [67]. Указанные методы являются длительными, токсичными, неселективными. Исследование, проведенное Ассоциацией международных фармацевтических производителей, показало, что на фармацевтическом рынке России доля фальсифицированных противотуберкулёзных препаратов составляет до 30% [115].

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

- обосновать условия хроматографического разделения изониазида, рифампицина и пиридоксина гидрохлорида; изониазида и пиразинамида; изониазида, пиразинамида и пиридоксина гидрохлорида методом высокоэффективной жидкостной хроматографии; разработать методики б качественного и количественного определения многокомпонентных лекарственных форм «Тубавит», «Фтизопирам», «Фтизопирам+Вб» с использованием метода ВЭЖХ;

- разработать проекты изменений ФСП на исследуемую группу препаратов.

Научная новизна работы:

Обоснован выбор внешних образцов сравнения* диметилового желтого, фенолфталеина, кислоты бензойной, калия феррицианида, калия хромата для спектрофотометрического анализа исследуемых противотуберкулёзных лекарственных средств.

Впервые разработан и экспериментально подтверждён модифицированный вариант спектрофотометрического анализа рифампицина, пиразинамида, ломефлоксацина, этионамида, протионамида, пиридоксина гидрохлорида, натрия пара-аминосалицилата в субстанции и однокомпонентных лекарственных формах, основанный на применении внешних образцов сравнения; в результате проведенной валидационной оценки разработанных методик установлено наличие высокой воспроизводимости, точности, отсутствие систематической ошибки.

Экспериментально подтверждены условия разделения (выбор колонки, сорбента, условий градиентного элюирования, подбор подвижной фазы, температуры, объема пробы) изониазида, рифампицина и пиридоксина гидрохлорида; изониазида и пиразинамида; изониазида, пиразинамида и пиридоксина-гидрохлорида методом ВЭЖХ.

Предложены и экспериментально подтверждены методики качественного и количественного определения многокомпонентных лекарственных форм «Тубавит», «Фтизопирам», «Фтизопирам+Вб» с использованием метода ВЭЖХ; в результате проведенной валидационной* оценки разработанных методик установлено наличие высокой воспроизводимости, точности, отсутствие систематической ошибки.

Практическая значимость работы:

Разработано 15 методик количественного определения субстанций исследуемой группы препаратов и 37 методик анализа однокомпонентных лекарственных форм с использованием модифицированного варианта спектрофотометрического метода, основанного на применении внешних образцов сравнения. Разработано 6 методик качественного и количественного определения многокомпонентных лекарственных форм «Тубавит», «Фтизопирам», «Фтизопирам+В6» методом ВЭЖХ. Разработанные методики апробированы в ОКК ОАО «Фармасинтез» (г. Иркутск), судебно-химическом отделении Иркутского областного бюро1 судебно-медицинской- экспертизы (г. Иркутск) и внедрены в учебный процесс кафедры фармацевтической и токсикологической химии ГОУ ВПО «ИГМУ». Получено 35 актов апробации и внедрения результатов данной работы. Разработанные методики защищены патентно-лицензионными документами: получены 4 Патента РФ на изобретения. Разработаны проекты изменений ФСП на исследуемые лекарственные средства. Апробация работы. Основные положения диссертационной работы обсуждались, на: X, XI Международной школе-семинаре «Люминесценция и лазерная физика» (Иркутск, 2007, 2008 г.г.); 62-й, 63-й, 64-й, 65-й межрегиональных конференциях по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2007, 2008, 2009, 2010 г.г.); научной конференции «Естествознание и гуманизм» (2007, 2008 г.г.); международной конференции «0птика-2007» (Санкт-Петербург, 2007 г.); научно-практической конференции 8

Современные вопросы теории и практики лекарствоведения» (Ярославль, 2007 г.); международной научной конференции «Оптика кристаллов и наноструктур» (Хабаровск, 2008 г.); международной научно-практической конференции «Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом, образовании» (Белгород, 2008 г.); научно - практической конференции «Фармация из века в век» (Санкт-Петербург, 2008 г.); международной научно-практической конференции «Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства» (Шимкент, Казахстан, 2009 г.).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ИГМУ по проблеме «Контроль качества лекарственных средств с использованием современных методов анализа» (номер Госрегистрации 01.91.0008620) и соответствует направлению проблемной комиссии по фармации и*фармакологии.

Основные положения, выносимые на защиту: результаты выбора и обоснования оптимальных условий и внешних образцов сравнения для спектрофотометрического анализа рифампицина, пиразинамида, ломефлоксацина, этионамида, протионамида, пиридоксина гидрохлорида, натрия пара-аминосалицилата;

- разработанные унифицированные методики спектрофотометрического анализа исследуемых противотуберкулёзных лекарственных средств с использованием внешних образцов сравнения и их валидационная оценка;

- результаты исследований по разработке методик анализа многокомпонентных лекарственных форм «Тубавит», «Фтизопирам», «Фтизопирам+Вб» методом ВЭЖХ и их валидационная оценка.

📎📎📎📎📎📎📎📎📎📎